单克隆抗体药物生产分享：小鼠组胺（HIS）ELISA检测试剂盒参数

　　单克隆抗体药物生产实验原理
　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠组胺（HIS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠组胺（HIS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
　　样本处理及要求
　　1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
　　4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
　　需要而未提供的试剂和器材
　　酶标仪（450nm）
　　高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
　　37℃恒温箱
　　蒸馏水或去离子水